临床试验用样本的合规要求：原始样本界定、选用规则与实操管控

       在体外诊断试剂临床试验实施过程中，样本选择是决定临床试验科学性、审评认可度的基础要素。临床试验样本是否与产品宣称适用样本保持一致，直接关系到临床试验结果能否证明产品在目标临床场景下的安全有效性。按照现行《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》以及注册审评一贯尺度，临床试验应当优先采用产品说明书中载明、预期临床使用的临床原始样本；经过提取、扩增等前处理得到的衍生物，例如人体样本 DNA 提取液、RNA 溶液，不属于原始临床样本，不能替代原始样本开展核心临床试验。本文围绕原始样本定义、选用原则、例外情形、样本管理、常见不合规情形等内容展开系统梳理，为申办方、CRO、临床机构在方案设计、样本入组、资料撰写提供可落地的参考依据。

一、核心概念厘清：什么是临床试验原始样本

       原始临床样本，指直接取自人体、仅完成临床常规采集与基础预处理，且未改变样本基质本质的生物样本，也是产品在上市后临床实际检测时接收的样本类型。常见类型包含血清、血浆、全血、尿液、脑脊液、胸腔积液、羊水、肺泡灌洗液、FFPE 组织切片、新鲜组织、拭子样本等。这里所说的基础预处理，是临床采集环节常规操作，例如血液样本离心分离血清、血浆，组织样本固定、包埋制成 FFPE，这类操作属于临床样本采集、保存的标准流程，没有脱离产品预期检测基质，依然判定为原始样本。

       与之相对，DNA 提取液、纯化后的 RNA、cDNA、扩增产物等，属于原始样本经过核酸提取、纯化、反转录、PCR 扩增之后得到的衍生样本。这类样本已经去除了原始基质，基质效应、抑制物、杂质背景、核酸完整性特征和原始临床样本存在巨大差异。即便衍生样本中的靶标核酸来自人体，它已经不是医疗机构日常送检、试剂盒直接上机检测的对象。审评层面明确：衍生核酸样本不能替代原始样本作为临床试验的主体样本。

       举一个典型场景：一款 NGS 基因检测试剂，说明书宣称适用样本为 FFPE 组织样本。临床试验不能直接采购第三方提取好的 DNA 开展比对试验，必须入组 FFPE 原始样本，由试验体系按照说明书规定的前处理、核酸提取、文库构建、测序流程完整操作。如果直接使用外购 DNA 开展试验，会被判定为样本基质不符合要求，临床试验数据不具备证明效力。

二、临床试验样本选用的基本原则

（一）样本类型必须匹配说明书宣称适用范围

临床试验入组样本类型，应当和产品预期适用样本一一对应。如果注册申报的说明书写明可同时支持血浆游离 DNA、FFPE 两种样本，则临床试验需要分别针对两类原始样本设置对应的样本集，分别完成性能验证和方法学比对，不能只用其中一类样本的数据去支撑另一类样本的宣称。

如果产品限定仅适用于血清，则不能大量使用血浆样本作为主要试验样本；针对羊水检测的产前诊断试剂，核心临床试验应当使用羊水原始样本，不能改用羊水提取核酸。若在临床试验中需要拓展说明书之外的样本类型，不能直接混入本次试验，应作为后续注册变更单独开展研究。

（二）样本基质、采集、保存、运输条件与临床使用保持一致

除样本种类之外，样本采集管类型、抗凝剂种类、采集后静置时间、离心条件、保存温度、保存时限、运输方式，都需要和说明书规定的操作要求保持统一。例如血浆样本，如果产品明确要求使用 EDTA 抗凝血浆，就不能采用肝素抗凝血浆入组，肝素会对很多核酸检测、免疫检测体系产生抑制，引入系统性偏倚，造成临床试验结果失真。

FFPE 样本还需要额外关注固定液类型、固定时长、切片厚度、储存年限；液体样本需要关注反复冻融次数，过度冻融造成靶标降解，同样会影响对产品真实性能的评估。所有样本处理、保存规则，都应当预先写入临床试验方案，作为入组排除标准。

（三）样本覆盖预期临床人群与疾病梯度

仅仅样本类型正确还不足以满足审评要求，样本集还需要覆盖产品预期适用人群，包含阴性样本、临界样本、不同突变丰度 / 浓度梯度的阳性样本、合并干扰因素的挑战性样本。对于肿瘤伴随诊断 NGS 试剂，需要覆盖不同肿瘤类型、不同突变等位基因频率、高 GC 区域样本、低肿瘤占比样本；对于感染类试剂，需要包含相近病原体交叉阳性样本、常见内源性干扰样本。样本的分布特征，应当和未来临床真实送检样本谱接近，避免试验样本过于理想化。

三、衍生样本的使用边界：哪些场景允许使用

很多申办方容易形成极端理解：衍生样本完全不能出现在临床试验中。实际审评逻辑不是一刀切禁止，而是衍生样本不能作为核心临床试验的入组受试样本，但可以用于部分配套预实验、方法学摸底、精密度辅助研究、参考品制备。

第一，衍生核酸样本可用于前期方法学摸索、预实验，用于调试反应体系、初步评估检测下限，但预实验数据不能纳入正式临床试验的统计数据集，不能用来支撑注册申报的有效性结论。

第二，在原始样本稀缺的特殊情形下，可采用经过充分论证的模拟样本、质粒、细胞系衍生核酸用于部分性能研究，例如检出限、精密度试验，但这部分属于补充验证，不能替代临床原始样本的比对试验，方案中必须单独区分、充分说明理由。

第三，试验过程中，试验组按照说明书流程，从原始样本中自行提取核酸，属于试剂盒检测流程内的一步，这种 “原始样本→提取核酸→上机检测” 是完整检测链路，和直接拿外购提取好的核酸来检测有本质区别。前者是产品检测流程，后者跳过了产品适用的原始基质。

四、临床试验方案与记录中的样本管控要点

       临床试验方案中，需要专门设置样本章节，清晰写明样本纳入、排除标准，对样本类型、采集规范、保存周期、冻融次数、拒收标准作出明确规定。方案中应当写明：本试验采用 XX（血清 / FFPE / 羊水等）原始临床样本，不采用外购提取核酸、纯化 DNA/RNA 作为受试样本。

       在临床试验原始记录、样本台账、溯源表中，每一份样本都需要保留溯源信息：采集时间、采集管、接收状态、保存条件、是否符合入组标准。如果样本接收时已经出现溶血、凝固、降解、超出保存时限，应当予以拒收并记录拒收原因。

       比对试验的参比体系同样需要关注样本基质一致性。如果参比方法同样要求原始样本，那么参比检测也必须在同源原始样本上开展，不能出现试验组使用原始样本，参比组直接使用提取核酸的情况，否则两组基质不对等，比对结果失去可比性。

五、审评高频缺陷与典型发补情形

       第一，核心临床试验直接采用外购 DNA、提取核酸作为受试样本，原始临床样本数量不足，这是最严重的一类问题，经常要求重新开展临床试验。

       第二，说明书同时宣称多种样本类型，但临床试验只做了其中一种原始样本，其余样本仅使用少量衍生核酸补充数据。

       第三，混淆 “流程内提取” 和 “前置提取”，在方案和总结报告中辩解：核酸提取是试剂盒步骤，因此提前提取核酸不算衍生样本，忽略了提前提取已经脱离原始基质。

       第四，样本类型和宣称不一致，例如产品宣称血浆样本，临床试验大量使用全血；适用 FFPE，却使用新鲜组织提取核酸。

       第五，入组样本缺少挑战性样本，阳性样本浓度集中在高浓度区间，缺少临界、低丰度样本，即便样本类型正确，依然会被质疑样本集代表性不足。

       第六，样本保存、抗凝条件和说明书不一致，试验过程未做管控，引入基质干扰风险。

六、总结

       临床试验样本的核心判定逻辑，在于还原产品上市之后真实的临床检测场景。原始样本是医疗机构直接送检、试剂盒直接对接的基质，是证明产品安全有效的基础载体；DNA 提取液、纯化核酸等衍生样本脱离原始基质，无法复现基质效应、抑制物、样本降解等临床真实风险，因此不能作为正式临床试验的受试样本。申办方在方案设计阶段，就应当锁定与说明书匹配的原始样本类型，规范采集、保存、流转流程，合理构建覆盖全梯度的样本集；衍生样本仅可限定用于预实验、参考品研究等补充场景，并且在资料中清晰区分边界，降低注册阶段发补风险。